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      玻璃層析柱的使用方法

      發布時間: 2022-06-18  點擊次數: 1856次
         玻璃層析柱適用于分子篩、離子交換、凝膠滲透與親和層析。隨著液相層析法進入血液制品生產,利用層析法,可純化血漿中多種蛋白,例如白蛋白等等。下面讓我們一起來了解一下玻璃層析柱的使用方法吧。
        先用洗液洗凈層析柱,用水清洗后再用蒸餾水清洗、干燥,在層析柱底鋪一層玻璃纖維或脫脂棉,而后將吸附劑氧化鋁裝入柱內。
        裝入的方法分濕法和干法兩種,濕法是將備用的溶劑轉入管內,將氧化鋁和溶劑調成漿狀慢慢地倒入管中,此時應將管的下端活塞打開使溶劑慢慢流出,吸附劑即漸漸沉子管底,加完氧化鋁后繼續使溶液流出,直至氧化鋁的沉降不再變動;
        干法是在管上端放一漏斗,使氧化鋁均勻地經漏斗成一細流慢慢裝入管內,中間不應間斷,時時輕輕敲打玻璃管使填轉均勻,全部加入后再加入溶劑使氧化鋁全部潤濕。
        一般以濕法裝柱為宜,因為容易把夾雜在氧化鉛中的氣泡趕出,無論采用那一種方法裝柱,必須注意以下事項。
       ?、俨荒苁寡趸X中有裂縫和氣泡,否則影響分離效果。
       ?、谘趸X的高度一般為玻璃管高度的3/4。
       ?、垩b好的氧化鋁柱上面覆蓋一層濾紙、玻璃纖維或脫脂棉以保持氧化鋁上端頂部平整,不受流入溶劑的干擾。
       ?、苎趸X柱上面要保持約0. 5 ~ lcm高的溶劑層,勿使氧化鋁露出溶劑的液面,上面裝一分液漏斗。
        待柱裝妥后,然后加樣,把將要分離的樣品溶在一定體積的溶劑中配成樣品溶液,將氧化鋁上的多余溶劑排出,直到柱內液面到達氧化鋁的表面時,停止排放。沿管壁加入樣品溶液,注意不讓溶劑把氧化鋁沖松浮起,樣品溶液加畢后,開放活塞使液體漸漸放出至溶劑液面和氧化鋁表面齊平(勿使氧化鋁表面干燥)。
        樣品吸附在氧化鋁柱上后,用合適的溶劑進行洗脫,樣品中各組分在氧化鋁上經過吸附、溶解、再吸附、再溶解······,規律地自上而下移動,使樣品分成若干色圈(或稱色環),達到分離、提純目的。
        必須注意層析柱的直徑愈粗形成的色圈愈狹小,色帶相互之間排列愈緊,對分辨和分離難度要大一些,但分離時間較短,速度較快,柱細長對色帶相互之間距離增大容易分開,但分離時間長,對裝填吸附劑操作不方便,通常選擇柱的直徑與長度的比例在1:30或1:25及1:20的范圍比較合適。
       
       
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